Исследование антифосфолипидных антител иммуноферментным и хемилюминесцентным методами

Антифосфолипидные антитела (аФЛ) являются признаком приобретенной тромбофилии и ассоциируются с рецидивирующими тромбозами и акушерской патологией. В классификационных критериях 2006 г. к серологическим маркерам антифосфолипидного синдрома (АФС) относятся волчаночный антикоагулянт, антитела к кардиолипину (аКЛ) и â2-гликопротеину 1 (анти- â2-GP1) классов IgG и IgM в средних и высоких концентрациях. Задача стандартизации уровней аФЛ остается нерешенной, что приводит к вариативности результатов.

Цель исследования – оценка сопоставимости результатов определения IgG/IgM аКЛ и IgG/IgM анти- â2-ГП1 с помощью иммуноферментного (ИФА) и хемилюминесцентного (ХЛА) анализов.

Материал и методы. Была исследована периферическая кровь у 192 пациентов (147 женщин и 45 мужчин), у 55 (29%) из которых был первичный АФС, у 12 (6%) – вероятный АФС, у 61 (32%) – системная красная волчанка (СКВ) с АФС и у 64 (33%) – СКВ без АФС. У всех участников определяли IgG/IgM аКЛ и IgG/IgM анти-â2-ГП1 методом ИФА. Методом ХЛА исследовали IgG/IgM аКЛ у 192 пациентов и IgG/IgМ анти- â2-ГП1 у 191.

Результаты и обсуждение. Оценка сопоставимости результатов ИФА и ХЛА показала существенные расхождения по позитивным значениям. Так, в 16% случаев отмечалось расхождение по уровням IgG аКЛ и IgM аКЛ по данным обоих методов (n=30 и n=31 соответственно), в 18% – по уровню IgG анти-С-ГП1 (n=34) и в 15% – по уровню IgM анти- â2-GP1 (n=28). В большей степени эти расхождения были связаны с более частым выявлением аФЛ в ХЛА при их отрицательных уровнях в ИФА, что свидетельствует о большей информативности метода ХЛА.

Однако небольшое количество пациентов были позитивны по аФЛ в ИФА, но негативны в ХЛА: 5 – с IgG аКЛ, 4 – с IgM аКЛ, 6 – с IgG анти- â2-ГП1 и 2 – с IgM анти-â2-ГП1.

Заключение. Показано, что ХЛА является более информативным методом определения IgG аКЛ и IgG анти-â2-ГП1, чем ИФА (p<0,05).

1. Arachchillage DRJ, Laffan M. Pathogenesis and management of antiphospholipid syndrome. Br J Haematol. 2017 Jul;178(2): 181-195. doi: 10.1111/bjh.14632.

2. Aringer M, Costenbader K, Daikh D, et al. 2019 European League Against Rheumatism/American College of Rheumatology Classification Criteria for Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis Rheumatol. 2019 Sep; 71(9):1400-1412. doi: 10.1002/art.40930.

3. Asherson RA. New subsets of the antiphospholipid syndrome in 2006: "PRE-APS" (probable APS) and microangiopathic antiphospholipid syndromes ("MAPS"). Autoimmun Rev. 2006 Dec;6(2):76-80. doi: 10.1016/j.autrev.2006.06.008.

4. Atsumi T, Amengual O, Yasuda S, Koike T. Antiprothrombin antibodies – are they worth assaying? Thromb Res. 2004;114(5-6):533-8. doi: 10.1016/j.thromres.2004.08.024.

5. Miyakis S, Lockshin MD, Atsumi T, et al. International consensus statement on an update of the classification criteria for definite antiphospholipid syndrome (APS). J Thromb Haemost. 2006 Feb;4(2):295-306. doi: 10.1111/j.1538-7836.2006.01753.x.

6. Bertolaccini ML, Atsumi T, Koike T, et al. Antiprothrombin antibodies detected in two different assay systems. Prevalence and clinical significance in systemic lupus erythematosus. Thromb Haemost. 2005 Feb;93(2):289-97. doi: 10.1160/TH04-06-0382.

7. Bidot CJ, Jy W, Horstman LL, et al. Factor VII/VIIa: a new antigen in the anti-phospholipid antibody syndrome. Br J Haematol. 2003 Feb;120(4):618-26. doi: 10.1046/j.1365-2141.2003.04161.x.

8. De Moerloose P, Reber G, Musial J, Arnout J. Analytical and clinical performance of a new, automated assay panel for the diagnosis of antiphospholipid syndrome. J Thromb Haemost. 2010 Jul;8(7):1540-6. doi: 10.1111/j.1538-7836.2010.03857.x. Epub 2010 Mar 16.

9. Александрова ЕН, Новиков АА, Решетняк ТМ и др. Антитела к 2-гликопротеину 1 и антитела к кардиолипину при антифосфолипидном синдроме: анализ чувствительности и специфичности. Клиническая медицина. 2003;(9):25-31.

10. Реброва ОЮ. Статистическии анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. Москва: МедиаСфера; 2002.

11. https://telemedai.ru/biblioteka-dokumentov/klinicheskie-ispytaniya-programmnogoobespecheniya-na-osnove-intellektualnyhtehnologij-luchevaya-diagnostika

12. Barbhaiya M, Zuily S, Naden R, et al. ACR/EULAR APS Classification Criteria Collaborators. The 2023 ACR/EULAR Antiphospholipid Syndrome Classification Criteria. Arthritis Rheumatol. 2023 Oct;75(10): 1687-1702. doi: 10.1002/art.42624.

13. Devreese KMJ, Bertolaccini ML, Branch DW, et al. An update on laboratory detection and interpretation of antiphospholipid antibodies for diagnosis of antiphospholipid syndrome: guidance from the ISTH-SSC Subcommittee on Lupus Anticoagulant/Anti phospholipid Antibodies. J Thromb Haemost. 2024 Nov 5:S1538-7836(24)00638-X. doi: 10.1016/j.jtha.2024.10.022.

14. Atsumi T, Chighizola CB, Fujieda Y, et al. 16th International congress on antiphospholipid antibodies task force report on antiphospholipid syndrome laboratory diagnostics and trends. Lupus. 2023 Dec;32(14):1625-1636. doi: 10.1177/09612033231211820.

15. Forastiero R, Papalardo E, Watkins M, et al. Evaluation of different immunoassays for the detection of antiphospholipid antibodies: report of a wet workshop during the 13th International Congress on Antiphospholipid Antibodies. Clin Chim Acta. 2014 Jan 20;428: 99-105. doi: 10.1016/j.cca.2013.11.009.

16. Reber G, Boehlen F, de Moerloose P. Technical aspects in laboratory testing for antiphospholipid antibodies: is standardization an impossible dream? Semin Thromb Hemost. 2008 Jun;34(4):340-6. doi: 10.1055/s-0028-1085476.

17. Sciascia S, Montaruli B, Infantino M. Antiphospholipid antibody testing. Med Clin (Barc). 2024 Aug;163 Suppl 1:S4-S9. doi: 10.1016/j.medcli.2024.06.002.

18. Van Hoecke F, Persijn L, Decavele AS, Devreese K. Performance of two new, automated chemiluminescence assay panels for anticardiolipin and anti-beta2-glycoprotein I antibodies in the laboratory diagnosis of the antiphospholipid syndrome. Int J Lab Hematol. 2012 Dec;34(6):630-40. doi: 10.1111/j.1751-553X.2012.01448.x.

19. Devreese KMJ, de Groot PG, de Laat B, et al. Guidance from the Scientific and Standardization Committee for lupus anticoagulant/antiphospholipid antibodies of the International Society on Thrombosis and Haemostasis: Update of the guidelines for lupus anticoagulant detection and interpretation. J Thromb Haemost. 2020 Nov;18(11): 2828-2839. doi: 10.1111/jth.15047.

20. Ткаченко ОЮ, Лапин СВ, Лазарева НМ и др. Сравнительный анализ информативности тест-систем разных производителей для определения антифосфолипидных антител для диагностики антифосфолипидного синдрома. Клиническая лабораторная диагностика. 2017;62(1):40-4.

21. Zhang S, Wu Z, Li P, et al. Evaluation of the Clinical Performance of a Novel Chemiluminescent Immunoassay for Detection of Anticardiolipin and Anti-Beta2-Glycoprotein 1 Antibodies in the Diagnosis of Antiphospholipid Syndrome. Medicine (Baltimore). 2015 Nov;94(46):e2059. doi: 10.1097/MD.0000000000002059.

22. Borghi MO, Beltagy A, Garrafa E, et al. Anti-Phospholipid Antibodies in COVID-19 Are Different From Those Detectable in the Anti-Phospholipid Syndrome. Front Immunol. 2020 Oct 15;11:584241. doi: 10.3389/fimmu.2020.584241.

23. Oku K, Amengual O, Kato M, et al. Significance of fully automated tests for the diagnosis of antiphospholipid syndrome. Thromb Res. 2016 Oct;146:1-6. doi: 10.1016/j.thromres.2016.08.018.

24. Capozzi A, Lococo E, Grasso M, et al. Detection of antiphospholipid antibodies by automated chemiluminescence assay. J Immunol Methods. 2012 May 31;379(1-2):48-52. doi: 10.1016/j.jim.2012.02.020.

25. Волкова МВ, Кундер ЕВ, Генералов ИИ, Роггенбук Д. Антифосфолипидные антитела: современные представления о патогенетическом действии и лабораторной диагностике. Вестник Витебского государственного медицинского университета 2015;(14-3):6-15.